AOPI-Dual-Fluoreszenz-Zählung ist der Assay-Typ, der zum Nachweis von Zellkonzentration und Lebensfähigkeit verwendet wird.Die Lösung ist eine Kombination aus Acridinorange (der grün fluoreszierende Nukleinsäurefarbstoff) und Propidiumiodid (der rot fluoreszierende Nukleinsäurefarbstoff).Propidiumiodid (PI) ist ein Membranausschlussfarbstoff, der nur in Zellen mit beschädigten Membranen eindringt, während Acridinorange in alle Zellen einer Population eindringen kann.Wenn beide Farbstoffe im Zellkern vorhanden sind, bewirkt Propidiumiodid eine Verringerung der Acridinorange-Fluoreszenz durch Fluoreszenz-Resonanz-Energietransfer (FRET).Infolgedessen färben sich kernhaltige Zellen mit intakten Membranen fluoreszierend grün und werden als lebend gezählt, während kernhaltige Zellen mit beschädigten Membranen nur fluoreszierend rot gefärbt und bei Verwendung des Countstar® FL-Systems als tot gezählt werden.Nicht kernhaltiges Material wie rote Blutkörperchen, Blutplättchen und Zelltrümmer fluoreszieren nicht und werden von der Countstar® FL-Software ignoriert.
Ablauf der Stammzelltherapie
Abbildung 4 Überwachung der Lebensfähigkeit und Zellzahl von mesenchymalen Stammzellen (MSCs) für den Einsatz in Zelltherapien.
Bestimmen Sie die MSC-Lebensfähigkeit durch AO/PI- und Trypanblau-Assay
Abbildung 2. A. Bild von MSC, gefärbt mit AO/PI und Trypanblau;2. Vergleich von AO/PI- und Trypanblau-Ergebnis vor und nach dem Transport.
Der Brechungsindex der Zelle ändert sich, Trypanblau-Färbung war nicht so offensichtlich, es ist schwierig, die Lebensfähigkeit nach dem Transport zu bestimmen.Während die Zweifarben-Fluoreszenz die Färbung lebender und toter kernhaltiger Zellen ermöglicht und selbst in Gegenwart von Trümmern, Blutplättchen und roten Blutkörperchen genaue Ergebnisse zur Lebensfähigkeit liefert.
