AOPI Dual-fluoresces skaitīšana ir testa veids, ko izmanto šūnu koncentrācijas un dzīvotspējas noteikšanai.Šķīdums ir akridīna oranža (zaļi fluorescējoša nukleīnskābes traipa) un propīdija jodīda (sarkanā fluorescējošā nukleīnskābes traipa) kombinācija.Propīdija jodīds (PI) ir membrānas izslēdzoša krāsviela, kas nonāk tikai šūnās ar bojātām membrānām, savukārt akridīna apelsīns spēj iekļūt visās populācijas šūnās.Ja kodolā ir abas krāsvielas, propīdija jodīds samazina akridīna oranžās fluorescences fluorescences rezonanses enerģijas pārnesi (FRET).Rezultātā kodola šūnas ar neskartām membrānām iekrāsojas fluorescējoši zaļā krāsā un tiek uzskatītas par dzīvām, savukārt kodola šūnas ar bojātām membrānām krāso tikai fluorescējošu sarkanu krāsu un tiek uzskatītas par mirušām, izmantojot Countstar® FL sistēmu.Materiāli bez kodoliem, piemēram, sarkanās asins šūnas, trombocīti un atkritumi nefluorescē, un Countstar® FL programmatūra tos ignorē.
Cilmes šūnu terapijas process
4. attēls. Mezenhimālo cilmes šūnu (MSC) dzīvotspējas un šūnu skaita uzraudzība izmantošanai šūnu terapijā.
Nosakiet MSC dzīvotspēju ar AO/PI un Trypan Blue testu
2. attēls. A. MSC attēls, kas iekrāsots ar AO/PI un Trypan Blue;2. AO/PI un Tripāna zilā rezultāta salīdzinājums pirms un pēc transportēšanas.
Šūnu refrakcijas indekss mainās, Tripan Blue krāsojums nebija tik acīmredzams, ir grūti noteikt dzīvotspēju pēc transportēšanas.Lai gan divkrāsu fluorescence ļauj iekrāsot dzīvas un mirušas šūnas ar kodoliem, radot precīzus dzīvotspējas rezultātus pat gružu, trombocītu un sarkano asins šūnu klātbūtnē.
