AOPI Dual-fluorescent counting je tip testa koji se koristi za otkrivanje koncentracije i vitalnosti ćelija.Rješenje je kombinacija akridin narandže (zeleno-fluorescentna boja nukleinske kiseline) i propidijum jodida (crvena fluorescentna boja nukleinske kiseline).Propidijum jodid (PI) je membranska ekskluziona boja koja ulazi samo u ćelije sa ugroženim membranama, dok akridin narandžasta može da prodre u sve ćelije u populaciji.Kada su obe boje prisutne u jezgru, propidijum jodid uzrokuje smanjenje akridin narandžaste fluorescencije putem fluorescentnog rezonantnog prenosa energije (FRET).Kao rezultat toga, ćelije sa jezgrom sa netaknutim membranama boje se fluorescentno zelenom bojom i računaju se kao žive, dok ćelije sa jezgrom sa ugroženim membranama boje samo fluorescentno crveno i računaju se kao mrtve kada se koristi Countstar® FL sistem.Materijali bez jezgre kao što su crvena krvna zrnca, trombociti i debris ne fluoresciraju i Countstar® FL softver ih ignorira.
Proces terapije matičnim ćelijama
Slika 4 Praćenje vitalnosti i broja ćelija mezenhimskih matičnih ćelija (MSC) za upotrebu u ćelijskoj terapiji.
Odredite održivost MSC pomoću AO/PI i Trypan Blue testa
Slika 2. A. Slika MSC obojena AO/PI i Trypan Blue;2. Poređenje rezultata AO/PI i Trypan blue prije i poslije transporta.
Indeks loma ćelije se mijenja, bojanje Trypan Blue nije bilo toliko očito, teško je odrediti održivost nakon transporta.Dok dvobojna fluorescencija omogućava bojenje živih i mrtvih ćelija sa jezgrom, generisanje preciznih rezultata održivosti čak i u prisustvu ostataka, trombocita i crvenih krvnih zrnaca.
