El recuento de fluorescencia dual de AOPI es el tipo de ensayo utilizado para detectar la concentración y la viabilidad de las células.La solución es una combinación de naranja de acridina (la tinción de ácido nucleico verde fluorescente) y yoduro de propidio (la tinción de ácido nucleico rojo fluorescente).El yoduro de propidio (PI) es un tinte de exclusión de membrana que solo ingresa a las células con membranas comprometidas, mientras que el naranja de acridina puede penetrar en todas las células de una población.Cuando ambos colorantes están presentes en el núcleo, el yoduro de propidio provoca una reducción de la fluorescencia naranja de acridina por transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET).Como resultado, las células nucleadas con membranas intactas se tiñen de verde fluorescente y se cuentan como vivas, mientras que las células nucleadas con membranas comprometidas solo se tiñen de rojo fluorescente y se cuentan como muertas cuando se usa el sistema ® FL.El material no nucleado, como los glóbulos rojos, las plaquetas y los desechos, no emite fluorescencia y el software ® FL los ignora.
Proceso de Terapia con Células Madre
Figura 4 Monitoreo de viabilidad y conteo celular de células madre mesenquimales (MSCs) para uso en terapias celulares.
Determinar la viabilidad de MSC por AO/PI y ensayo Trypan Blue
Figura 2. A. Imagen de MSC teñidas con AO/PI y Trypan Blue;2. Comparación de los resultados de AO/PI y azul tripán antes y después del transporte.
El índice de refracción de las células cambia, la tinción con azul de tripán no era tan obvia, es difícil determinar la viabilidad después del transporte.Mientras que la fluorescencia de dos colores permite la tinción de células nucleadas vivas y muertas, generando resultados precisos de viabilidad incluso en presencia de desechos, plaquetas y glóbulos rojos.
