Numărarea cu fluorescență duală AOPI este tipul de analiză utilizat pentru detectarea concentrației și viabilității celulelor.Soluția este o combinație de portocaliu de acridină (colorația verde-fluorescentă a acidului nucleic) și iodură de propidiu (colorația roșie-fluorescentă a acidului nucleic).Iodura de propidiu (PI) este un colorant de excludere a membranei care intră doar în celulele cu membrane compromise, în timp ce portocaliul de acridină este capabil să pătrundă în toate celulele dintr-o populație.Când ambii coloranți sunt prezenți în nucleu, iodura de propidiu determină o reducere a fluorescenței portocalii de acridină prin transferul de energie de rezonanță a fluorescenței (FRET).Ca rezultat, celulele nucleate cu membrane intacte colorează verde fluorescent și sunt numărate ca fiind vii, în timp ce celulele nucleate cu membrane compromise colorează doar roșu fluorescent și sunt numărate ca moarte când se utilizează sistemul Countstar® FL.Materialele nenucleate, cum ar fi globulele roșii, trombocitele și resturile nu au fluorescență și sunt ignorate de software-ul Countstar® FL.
Procesul de terapie cu celule stem
Figura 4 Monitorizarea viabilității și a numărului de celule ale celulelor stem mezenchimale (MSC) pentru utilizarea în terapiile celulare.
Determinați viabilitatea MSC prin testul AO/PI și albastru tripan
Figura 2. A. Imaginea MSC colorată cu AO/PI și Trypan Blue;2. Comparația dintre rezultatul AO/PI și albastru tripan înainte și după transport.
Indicele de refracție celulară se modifică, colorarea cu albastru tripan nu a fost atât de evidentă, este dificil de determinat viabilitatea după transport.În timp ce fluorescența cu două culori permite colorarea celulelor nucleate vii și moarte, generarea de rezultate precise de viabilitate chiar și în prezența resturilor, trombocitelor și celulelor roșii din sânge.
