O reconto de fluorescencia dual AOPI é o tipo de ensaio utilizado para detectar a concentración e viabilidade celular.A solución é unha combinación de laranxa de acridina (a tinción de ácido nucleico fluorescente verde) e ioduro de propidio (a tinción de ácido nucleico fluorescente vermello).O ioduro de propidio (PI) é un colorante de exclusión de membrana que só entra nas células con membranas comprometidas, mentres que a laranxa de acridina é capaz de penetrar en todas as células dunha poboación.Cando ambos os colorantes están presentes no núcleo, o ioduro de propidio provoca unha redución da fluorescencia de laranxa de acridina pola transferencia de enerxía de resonancia da fluorescencia (FRET).Como resultado, as células nucleadas con membranas intactas téñense de verde fluorescente e cóntanse como vivas, mentres que as células nucleadas con membranas comprometidas só manchan de vermello fluorescente e cóntanse como mortas cando se usa o sistema Countstar® FL.O material non nucleado, como glóbulos vermellos, plaquetas e restos, non produce fluorescencia e o software Countstar® FL ignora.
Proceso de terapia con células nai
Figura 4 Monitorización da viabilidade e do reconto celular de células nai mesenquimales (MSC) para o seu uso en terapias celulares.
Determine a viabilidade do MSC mediante o ensaio AO/PI e azul tripano
Figura 2. A. Imaxe de MSC tinguida por AO/PI e azul tripán;2. Comparación do resultado AO/PI e azul tripano antes e despois do transporte.
O índice de refracción celular cambia, a tinción con azul tripano non era tan obvia, é difícil determinar a viabilidade despois do transporte.Aínda que a fluorescencia de dobre cor permite a tinción de células nucleadas vivas e mortas, xerando resultados de viabilidade precisos mesmo en presenza de restos, plaquetas e glóbulos vermellos.
