AOPI डुअल-फ्लोरेसेस गणना सेल एकाग्रता र व्यवहार्यता पत्ता लगाउन प्रयोग गरिने परख प्रकार हो।समाधान एक्रिडाइन सुन्तला (हरियो-फ्लोरोसेन्ट न्यूक्लिक एसिड दाग) र प्रोपिडियम आयोडाइड (रातो-फ्लोरोसेन्ट न्यूक्लिक एसिड दाग) को संयोजन हो।प्रोपिडियम आयोडाइड (PI) एक झिल्ली बहिष्करण डाई हो जुन केवल सम्झौता झिल्ली भएका कक्षहरूमा प्रवेश गर्दछ, जबकि एक्रिडाइन सुन्तला जनसंख्यामा सबै कोशिकाहरू प्रवेश गर्न सक्षम हुन्छ।जब दुबै रंगहरू न्यूक्लियसमा उपस्थित हुन्छन्, प्रोपिडियम आयोडाइडले फ्लोरोसेन्स रेजोनेन्स एनर्जी ट्रान्सफर (FRET) द्वारा एक्रिडाइन सुन्तला प्रतिदीप्तिमा कमी निम्त्याउँछ।नतिजाको रूपमा, अक्षुण्ण झिल्ली भएका न्यूक्लिएटेड कोशिकाहरू फ्लोरोसेन्ट हरियो दाग हुन्छन् र प्रत्यक्ष रूपमा गनिन्छन्, जबकि सम्झौता गरिएका झिल्लीहरू भएका न्यूक्लिएटेड कोशिकाहरू फ्लोरोसेन्ट रातो मात्र दाग हुन्छन् र Countstar® FL प्रणाली प्रयोग गर्दा मृतका रूपमा गणना गरिन्छ।रातो रक्त कोशिकाहरू, प्लेटलेटहरू र मलबे जस्ता गैर-न्यूक्लिएटेड सामग्रीहरू फ्लोरोस गर्दैनन् र Countstar® FL सफ्टवेयरद्वारा बेवास्ता गरिन्छ।
स्टेम सेल थेरापी को प्रक्रिया
चित्र 4 सेल थेरापीहरूमा प्रयोगको लागि mesenchymal स्टेम सेल (MSCs) को व्यवहार्यता र सेल गणनाको निगरानी।
AO/PI र Trypan ब्लू परख द्वारा MSC व्यवहार्यता निर्धारण गर्नुहोस्
चित्र २. A. AO/PI र Trypan Blue द्वारा दागिएको MSC को छवि;2. यातायात अघि र पछि AO/PI र Trypan निलो नतिजाको तुलना।
सेल अपवर्तक सूचकांक परिवर्तन, Trypan ब्लू दाग स्पष्ट थिएन, यो यातायात पछि व्यवहार्यता निर्धारण गर्न गाह्रो छ।जबकि दोहोरो-रङ फ्लोरोसेन्सले जीवित र मृत न्यूक्लिएटेड कोशिकाहरूलाई दाग लगाउन अनुमति दिन्छ, भग्नावशेष, प्लेटलेटहरू र रातो रक्त कोशिकाहरूको उपस्थितिमा पनि सही व्यवहार्यता परिणामहरू उत्पन्न गर्दछ।
