Η μέτρηση διπλού φθορισμού AOPI είναι ο τύπος ανάλυσης που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση της συγκέντρωσης και της βιωσιμότητας των κυττάρων.Το διάλυμα είναι ένας συνδυασμός πορτοκαλί ακριδίνης (η χρώση πράσινου-φθορισμού νουκλεϊκού οξέος) και ιωδιούχου προπιδίου (κόκκινο φθορίζον νουκλεϊκό οξύ).Το ιωδιούχο προπίδιο (PI) είναι μια χρωστική αποκλεισμού μεμβράνης που εισέρχεται μόνο σε κύτταρα με υποβαθμισμένες μεμβράνες, ενώ το πορτοκαλί ακριδίνης είναι σε θέση να διεισδύσει σε όλα τα κύτταρα ενός πληθυσμού.Όταν υπάρχουν και οι δύο χρωστικές στον πυρήνα, το ιωδιούχο προπίδιο προκαλεί μείωση του φθορισμού πορτοκαλί ακριδίνης μέσω μεταφοράς ενέργειας συντονισμού φθορισμού (FRET).Ως αποτέλεσμα, τα πυρηνωμένα κύτταρα με άθικτες μεμβράνες χρωματίζουν το φθορίζον πράσινο και υπολογίζονται ως ζωντανά, ενώ τα πυρηνωμένα κύτταρα με υποβαθμισμένες μεμβράνες χρωματίζουν μόνο το φθορίζον κόκκινο και υπολογίζονται ως νεκρά όταν χρησιμοποιείται το σύστημα Countstar® FL.Μη πυρηνοποιημένο υλικό όπως ερυθρά αιμοσφαίρια, αιμοπετάλια και υπολείμματα δεν φθορίζουν και αγνοούνται από το λογισμικό Countstar® FL.
Διαδικασία Θεραπείας Βλαστοκυττάρων
Εικόνα 4 Παρακολούθηση βιωσιμότητας και κυτταρικού αριθμού μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων (MSCs) για χρήση σε κυτταρικές θεραπείες.
Προσδιορίστε τη βιωσιμότητα του MSC με ανάλυση AO/PI και Trypan Blue
Εικόνα 2. Α. Εικόνα MSC που χρωματίστηκε με AO/PI και Trypan Blue.2. Σύγκριση του αποτελέσματος AO/PI και Trypan blue πριν και μετά τη μεταφορά.
Ο δείκτης διάθλασης των κυττάρων αλλάζει, η χρώση Trypan Blue δεν ήταν τόσο προφανής, είναι δύσκολο να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα μετά τη μεταφορά.Ενώ ο φθορισμός διπλού χρώματος επιτρέπει τη χρώση ζωντανών και νεκρών εμπύρηνων κυττάρων, η δημιουργία ακριβών αποτελεσμάτων βιωσιμότητας ακόμη και με την παρουσία υπολειμμάτων, αιμοπεταλίων και ερυθρών αιμοσφαιρίων.
