AOPI Dual-fluoresces-tælling er den analysetype, der bruges til at detektere cellekoncentration og levedygtighed.Opløsningen er en kombination af acridinorange (den grøn-fluorescerende nukleinsyrefarve) og propidiumiodid (den rød-fluorescerende nukleinsyrefarve).Propidiumiodid (PI) er et membranudelukkende farvestof, der kun trænger ind i celler med kompromitterede membraner, mens acridin orange er i stand til at trænge ind i alle celler i en population.Når begge farvestoffer er til stede i kernen, forårsager propidiumiodid en reduktion i acridinorange fluorescens ved fluorescensresonansenergioverførsel (FRET).Som et resultat heraf farves nukleerede celler med intakte membraner fluorescerende grønne og tælles som levende, hvorimod nukleerede celler med kompromitterede membraner kun farves fluorescerende røde og tælles som døde, når Countstar® FL-systemet bruges.Ikke-kerneholdigt materiale såsom røde blodlegemer, blodplader og affald fluorescerer ikke og ignoreres af Countstar® FL-softwaren.
Processen med stamcelleterapi
Figur 4 Overvågning af levedygtighed og celletal af mesenkymale stamceller (MSC'er) til brug i celleterapier.
Bestem MSC-levedygtighed ved AO/PI og Trypan Blue-assay
Figur 2. A. Billede af MSC farvet med AO/PI og Trypan Blue;2. Sammenligning af AO/PI og trypanblåt resultat før og efter transport.
Cellernes brydningsindeks ændres, Trypan Blue-farvning var ikke så tydelig, det er svært at bestemme levedygtigheden efter transport.Mens dobbeltfarvet fluorescens giver mulighed for farvning af levende og døde kerneholdige celler, genererer nøjagtige levedygtighedsresultater selv i tilstedeværelsen af snavs, blodplader og røde blodlegemer.
