AOPI двойно-флуоресцентно броене е типът анализ, използван за откриване на клетъчна концентрация и жизнеспособност.Разтворът е комбинация от акридиново оранжево (зелено-флуоресцентно оцветяване на нуклеинова киселина) и пропидиев йодид (червено-флуоресцентно оцветяване на нуклеинова киселина).Пропидиев йодид (PI) е багрило за изключване на мембраната, което влиза само в клетки с компрометирани мембрани, докато акридин портокалът е в състояние да проникне във всички клетки в популацията.Когато и двете багрила присъстват в ядрото, пропидиевият йодид причинява намаляване на акридиново оранжевата флуоресценция чрез флуоресцентен резонансен пренос на енергия (FRET).В резултат на това клетките с ядра с непокътнати мембрани оцветяват флуоресцентно зелено и се считат за живи, докато нуклеираните клетки с компрометирани мембрани оцветяват само флуоресцентно червено и се броят като мъртви, когато се използва системата Countstar® FL.Безядрени материали като червени кръвни клетки, тромбоцити и остатъци не флуоресцират и се игнорират от софтуера Countstar® FL.
Процес на терапия със стволови клетки
Фигура 4 Мониторинг на жизнеспособността и клетъчния брой на мезенхимни стволови клетки (MSCs) за използване в клетъчни терапии.
Определете жизнеспособността на MSC чрез анализ на AO/PI и Trypan Blue
Фигура 2. А. Изображение на MSC, оцветено с AO/PI и Trypan Blue;2. Сравнение на резултата от AO/PI и Trypan blue преди и след транспортиране.
Индексът на пречупване на клетките се променя, оцветяването с трипаново синьо не беше толкова очевидно, трудно е да се определи жизнеспособността след транспортиране.Докато двуцветната флуоресценция позволява оцветяване на живи и мъртви клетки с ядрени клетки, генерирането на точни резултати за жизнеспособност дори при наличие на остатъци, тромбоцити и червени кръвни клетки.
