AOPI dvojno fluorescenčno štetje je vrsta testa, ki se uporablja za odkrivanje koncentracije in sposobnosti preživetja celic.Raztopina je kombinacija akridin oranžne (zeleno-fluorescentno obarvanje nukleinske kisline) in propidijevega jodida (rdeča fluorescenčna barva nukleinske kisline).Propidijev jodid (PI) je membransko izločevalno barvilo, ki vstopi le v celice z ogroženimi membranami, medtem ko akridin oranžna lahko prodre v vse celice v populaciji.Kadar sta obe barvili prisotni v jedru, propidijev jodid povzroči zmanjšanje akridinsko oranžne fluorescence s fluorescenčno resonančnim prenosom energije (FRET).Posledično se celice z jedri z nepoškodovanimi membranami obarvajo v fluorescentno zeleno in se štejejo za žive, medtem ko celice z jedri z ogroženimi membranami obarvajo samo fluorescenčno rdeče in se štejejo kot mrtve pri uporabi sistema Countstar® FL.Materiali brez jedra, kot so rdeče krvne celice, trombociti in ostanki, ne fluorescirajo in jih programska oprema Countstar® FL ignorira.
Proces zdravljenja z matičnimi celicami
Slika 4 Spremljanje sposobnosti preživetja in števila celic mezenhimskih matičnih celic (MSC) za uporabo v celičnih terapijah.
Določite sposobnost preživetja MSC s testom AO/PI in Trypan Blue
Slika 2. A. Slika MSC, obarvana z AO/PI in Trypan Blue;2. Primerjava rezultata AO/PI in Trypan blue pred in po transportu.
Indeks loma celic se spreminja, obarvanje Trypan Blue ni bilo tako očitno, težko je določiti sposobnost preživetja po transportu.Medtem ko dvobarvna fluorescenca omogoča obarvanje živih in mrtvih celic z jedri, ustvarja natančne rezultate preživetja tudi v prisotnosti ostankov, trombocitov in rdečih krvnih celic.
