Η ανάλυση ανοσοφαινοτύπου είναι ένα τυπικό πείραμα που εκτελείται σε ερευνητικά πεδία που σχετίζονται με κύτταρα για τη διάγνωση διαφόρων ασθενειών (αυτοάνοση νόσος, νόσος ανοσοανεπάρκειας, διάγνωση όγκων, αιμόσταση, αλλεργικές ασθένειες και πολλά άλλα) και παθολογίας ασθενειών.Χρησιμοποιείται επίσης για τη δοκιμή της ποιότητας των κυττάρων σε διάφορες έρευνες κυτταρικών ασθενειών.Η κυτταρομετρία ροής και το μικροσκόπιο φθορισμού είναι οι συνήθεις μέθοδοι ανάλυσης σε ερευνητικά ινστιτούτα κυτταρικών ασθενειών που χρησιμοποιούνται για τον ανοσοφαινοτυπικό προσδιορισμό.Ωστόσο, αυτές οι μέθοδοι ανάλυσης μπορούν να παρέχουν εικόνες ή σειρές δεδομένων μόνο, οι οποίες ενδέχεται να μην πληρούν τις αυστηρές απαιτήσεις έγκρισης των ρυθμιστικών αρχών.
M Dominici el, Cytotherapy (2006) Vol.8, Νο. 4, 315-317
Προσδιορισμός του ανοσοφαινοτύπου των AdMSCs
Ο ανοσοφαινότυπος των AdMSC προσδιορίστηκε με Countstar FL, τα AdMSC επωάστηκαν με διαφορετικό αντίσωμα αντίστοιχα (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105 και HLADR).Δημιουργήθηκε μια διαδικασία εφαρμογής χρώματος σήματος ρυθμίζοντας το Πράσινο κανάλι να απεικονίζει φθορισμό PE, συν ένα φωτεινό πεδίο.Η τμηματοποίηση αναφοράς εικόνας φωτεινού πεδίου εφαρμόστηκε ως μάσκα για τη δειγματοληψία του σήματος φθορισμού PE.Τα αποτελέσματα του CD105 παρουσιάστηκαν (Εικόνα 1).
Σχήμα 1 Αναγνώριση του ανοσοφαινοτύπου των AdMSCs.Α. Φωτεινό πεδίο και εικόνα φθορισμού των AdMSC.Β. Ανίχνευση δεικτών CD των AdMSC από το Countstar FL
Ποιοτικός έλεγχος των MSCs – επικύρωση αποτελεσμάτων για κάθε μεμονωμένο κύτταρο
Εικόνα 2 Α: Τα αποτελέσματα του Countstar FL εμφανίστηκαν σε FCS express 5plus, δεσμεύοντας το θετικό ποσοστό του CD105 και μεμονωμένα κελιά πίνακα επισκόπησης.Β: Προσαρμοσμένη πύλη στη δεξιά πλευρά, οι εικόνες του πίνακα μεμονωμένων κυττάρων δείχνουν εκείνα τα κύτταρα με υψηλή έκφραση του CD105.Γ: Προσαρμοσμένη πύλη στην αριστερή πλευρά, οι εικόνες του πίνακα μεμονωμένων κελιών εμφανίζουν εκείνα τα κύτταρα με χαμηλή έκφραση του CD105.
Φαινοτυπικές αλλαγές κατά τη μεταφορά
Εικόνα 3. Α: Ποσοτική ανάλυση του θετικού ποσοστού του CD105 σε διαφορετικά δείγματα με λογισμικό FCS express 5 plus.B: Οι εικόνες υψηλής ποιότητας παρέχουν πρόσθετες μορφολογικές πληροφορίες.Γ: Επικυρωμένα αποτελέσματα με μικρογραφίες κάθε μεμονωμένου κελιού, τα εργαλεία λογισμικού FCS χώρισαν τα κελιά σε διαφορετικά
