L'analisi di immunofenotipizzazione è un tipico esperimento eseguito in campi di ricerca relativi alle cellule per diagnosticare varie malattie (malattie autoimmuni, malattie da immunodeficienza, diagnosi di tumori, emostasi, malattie allergiche e molte altre) e patologie patologiche.Viene anche utilizzato per testare la qualità cellulare in varie ricerche sulle malattie cellulari.La citometria a flusso e il microscopio a fluorescenza sono i metodi di analisi di routine negli istituti di ricerca sulle malattie cellulari utilizzati per l'immuno-fenotipizzazione.Ma questi metodi di analisi possono fornire solo immagini o serie di dati che potrebbero non soddisfare i severi requisiti di approvazione delle autorità di regolamentazione.
M Dominici el, Citoterapia (2006) Vol.8, n. 4, 315-317
Identificazione dell'immunofenotipo di AdMSC
L'immunofenotipo degli AdMSC è stato determinato da Countstar FL, gli AdMSC sono stati incubati rispettivamente con anticorpi diversi (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105 e HLADR).È stata creata una procedura di applicazione del colore del segnale impostando il canale verde sulla fluorescenza PE dell'immagine, oltre a un campo luminoso.La segmentazione di riferimento dell'immagine in campo chiaro è stata applicata come maschera per campionare il segnale di fluorescenza PE.Sono stati mostrati i risultati di CD105 (Figura 1).
Figura 1 Identificazione dell'immunofenotipo di AdMSC.A. Immagine in campo chiaro e fluorescenza di AdMSC;B. Rilevamento di marcatori CD di AdMSC da parte di Countstar FL
Controllo di qualità delle MSC – validazione dei risultati per ogni singola cella
Figura 2 A: I risultati di Countstar FL sono stati visualizzati in FCS express 5plus, gating la percentuale positiva di CD105 e singole celle della tabella panoramica.B: gating regolato sul lato destro, le immagini della tabella a cella singola mostrano quelle celle con un'elevata espressione di CD105.C: gating regolato sul lato sinistro, le immagini della tabella delle singole celle mostrano quelle celle con una bassa espressione di CD105.
Cambiamenti fenotipici durante il trasporto
Figura 3. A: Analisi quantitativa della percentuale positiva di CD105 in diversi campioni mediante il software FCS express 5 plus.B: Le immagini di alta qualità forniscono ulteriori informazioni morfologiche.C: Risultati convalidati da miniature di ogni singola cella, gli strumenti software FCS hanno diviso le celle in diverse
