Imunofenotypizačná analýza je typický experiment vykonávaný v oblasti výskumu súvisiaceho s bunkami na diagnostiku rôznych chorôb (autoimunitné ochorenie, imunodeficitné ochorenie, diagnostika nádorov, hemostáza, alergické ochorenia a mnohé ďalšie) a patológiu chorôb.Používa sa tiež na testovanie kvality buniek pri výskume rôznych bunkových chorôb.Prietoková cytometria a fluorescenčný mikroskop sú rutinnými analytickými metódami vo výskumných ústavoch bunkových chorôb, ktoré sa používajú na imunofenotypizáciu.Tieto metódy analýzy však môžu poskytnúť iba obrázky alebo série údajov, ktoré nemusia spĺňať prísne schvaľovacie požiadavky regulačných orgánov.
M Dominici el, Cytoterapia (2006) Vol.8, č. 4, 315-317
Identifikácia imunofenotypu AdMSC
Imunofenotyp AdMSC sa určil pomocou Countstar FL, AdMSC sa inkubovali s rôznymi protilátkami (CD29, CD34, CD45, CD56, CD73, CD105 a HLADR).Procedúra nanášania signálnej farby bola vytvorená nastavením zeleného kanála na zobrazenie fluorescencie PE a jasného poľa.Referenčná segmentácia obrazu v jasnom poli sa použila ako maska na vzorkovanie PE fluorescenčného signálu.Boli ukázané výsledky CD105 (obrázok 1).
Obrázok 1 Identifikácia imunofenotypu AdMSC.A. Jasné pole a fluorescenčný obraz AdMSC;B. Detekcia CD markerov AdMSC spoločnosťou Countstar FL
Kontrola kvality MSC – validácia výsledkov pre každú jednotlivú bunku
Obrázok 2 A: Výsledky Countstar FL sa zobrazili v FCS express 5plus, vrátanie pozitívneho percenta CD105 a prehľad jednotlivých buniek.B: Upravené hradlovanie na pravú stranu, obrázky tabuľky jednotlivých buniek ukazujú bunky s vysokou expresiou CD105.C: Upravené hradlovanie na ľavej strane, tabuľka obrázkov jednotlivých buniek ukazuje bunky s nízkou expresiou CD105.
Fenotypické zmeny počas prepravy
Obrázok 3. A: Kvantitatívna analýza pozitívneho percenta CD105 v rôznych vzorkách pomocou softvéru FCS express 5 plus.B: Snímky vysokej kvality poskytujú dodatočné morfologické informácie.C: Overené výsledky pomocou miniatúr každej jednotlivej bunky, softvérové nástroje FCS rozdelili bunky na rôzne
