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Bestimmung von Lebensfähigkeit, Morphologie und Phänotyp für die Stammzelltherapie

Mesenchymale Stammzellen sind eine Untergruppe pluripotenter Stammzellen, die aus dem Mesoderm isoliert werden können.Mit ihren Selbstreplikations-Erneuerungs- und multidirektionalen Differenzierungseigenschaften besitzen sie ein hohes Potenzial für verschiedene Therapien in der Medizin.Mesenchymale Stammzellen haben einen einzigartigen Immunphänotyp und eine Fähigkeit zur Immunregulation.Daher werden mesenchymale Stammzellen bereits vielfach in der Stammzelltransplantation, im Tissue Engineering und in der Organtransplantation eingesetzt.Und über diese Anwendungen hinaus werden sie als ideales Werkzeug in der Gewebezüchtung als Seeder-Zellen in einer Reihe von Grundlagen- und klinischen Forschungsexperimenten verwendet.

Der Countstar Rigel kann die Konzentration, Lebensfähigkeit, Apoptoseanalyse und phänotypische Merkmale (und deren Veränderungen) während der Produktion und Differenzierung dieser Stammzellen überwachen.Der Countstar Rigel hat auch den Vorteil, zusätzliche morphologische Informationen zu gewinnen, die durch das permanente Hellfeld und die fluoreszenzbasierten Bildaufnahmen während des gesamten Prozesses der Zellqualitätsüberwachung bereitgestellt werden.Der Countstar Rigel bietet eine schnelle, ausgeklügelte und zuverlässige Methode zur Qualitätskontrolle von Stammzellen.

 

 

Überwachung der Lebensfähigkeit von MSCs in der regenerativen Medizin

 

Abbildung 1 Überwachung der Lebensfähigkeit und Zellzahl von mesenchymalen Stammzellen (MSCs) für den Einsatz in Zelltherapien

 

Stammzellen sind eine der vielversprechendsten Behandlungen in der regenerativen Zelltherapie.Von der Ernte von MSC bis zur Behandlung ist es wichtig, während aller Schritte der Stammzellproduktion eine hohe Lebensfähigkeit der Stammzellen aufrechtzuerhalten (Abbildung 1).Der Stammzellenzähler von Countstar überwacht die Lebensfähigkeit und Konzentration von Stammzellen, um eine entscheidende Rolle bei der Qualitätskontrolle zu spielen.

 

 

Überwachung der morphologischen Veränderungen von MSC nach dem Transport

 

Der Durchmesser und die Aggregation wurden ebenfalls von Countstar Rigel bestimmt.Der Durchmesser von AdMSCs wurde nach dem Transport im Vergleich zu vor dem Transport drastisch verändert.Der Durchmesser vor dem Transport betrug 19 µm, stieg aber nach dem Transport auf 21 µm an.Die Aggregation vor dem Transport betrug 20 %, stieg aber nach dem Transport auf 25 %.Aus den von Countstar Rigel aufgenommenen Bildern geht hervor, dass sich der Phänotyp von AdMSCs nach dem Transport drastisch verändert hat.Die Ergebnisse sind in Abbildung 3 dargestellt.

 

 

Identifizierung von AdMSCs im Zellphänotyp

Derzeit sind in einer bereits 2006 definierten Stellungnahme der International Society for Cellular Therapy (ISCT) die Mindeststandard-Identifizierungstestverfahren zur Qualitätssicherung von überwachten MSC aufgeführt.

 

 

Schneller Nachweis von Apoptose in MSCs mit FITC-konjugiertem Annexin-V und 7-ADD-Einführung

Zellapoptose kann mit FITC-konjugiertem Annexin-V und 7-ADD nachgewiesen werden.PS wird normalerweise nur auf dem intrazellulären Segel der Plasmamembran in gesunden Zellen gefunden, aber während der frühen Apoptose geht die Membranasymmetrie verloren und PS wandert zum äußeren Segel.

 

Abbildung 6 Nachweis von Apoptose in MSCs durch Countstar Rigel

A. Visuelle Untersuchung des Fluoreszenzbildes zum Nachweis von Apoptose in MSCs
B. Streudiagramme der Apoptose in MSCs durch FCS-Express
C. Prozentsatz der Zellpopulation basierend auf % normalen, % apoptotischen und % nekrotischen/apoptotischen Zellen im sehr späten Stadium.

 

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