Suspensioonis rakke sisaldav proov segatakse trüpaansinise värvainega, seejärel tõmmatakse see Countstar Chamber Slide'i, mida analüüsib Countstar Automated Cell Counter.Klassikalise trüpaansinise rakkude loendamise põhimõttel põhinevad Countstari instrumendid integreerivad täiustatud optilise kujutise tehnoloogia, intelligentse pildituvastustehnoloogia ja võimsad tarkvaraalgoritmid, mis mitte ainult ei taga rakkude kontsentratsiooni ja elujõulisust, vaid annavad ka teavet rakkude kontsentratsiooni, elujõulisuse, agregatsioonikiiruse, ümaruse kohta. ja läbimõõdu jaotus ainult ühe jooksuga.
Agregeeritud rakkude analüüs
Joonis 3 Agregeeritud rakkude loendamine.
A. Rakuproovi kujutis;
B. Countstar BioTechi tarkvara identifitseerimismärgiga rakuproovi kujutis.(Roheline ring: elav rakk, kollane ring: surnud rakk, punane ring: agregeeritud rakk).
C. Koondhistogramm
Mõned primaarsed rakud või subkultuurrakud on halva kultiveerimisseisundi või liigse seedimise korral altid agregeeruma, põhjustades seega suuri raskusi rakkude loendamisel.Agregatsiooni kalibreerimisfunktsiooni abil saab Countstar teostada agregatsioonide stimuleerimise arvutusi, et tagada täpne rakkude loendamine ning saada agregatsioonikiirus ja agregatsiooni histogramm, andes seeläbi aluse eksperimenteerijatele rakkude oleku hindamiseks.
Rakkude kasvu jälgimine
Joonis 4 Rakkude kasvukõver.
Rakkude kasvukõver on levinud meetod rakkude arvu absoluutse kasvu mõõtmiseks, oluline näitaja rakkude kontsentratsiooni määramisel ja üks rakkude põhiliste bioloogiliste omaduste kultiveerimise põhiparameetreid.Rakkude arvu dünaamilise muutuse täpseks kirjeldamiseks kogu protsessi vältel võib tüüpilise kasvukõvera jagada 4 ossa: inkubatsiooniperiood aeglase kasvuga;suure kaldega eksponentsiaalne kasvufaas, platoofaas ja langusperiood.Rakkude kasvukõvera saab saada elusrakkude arvu (10 000/ml) graafiku alusel kultiveerimisaja (h või d) suhtes.
Rakkude kontsentratsiooni ja elujõulisuse mõõtmine
Joonis 1 Pilte jäädvustas Countstar BioTech, kuna suspensioonis olevad rakud (Vero, 3T3, 549, B16, CHO, Hela, SF9 ja MDCK) värviti vastavalt Trypan Blue värviga.
Countstar on rakendatav rakkude puhul, mille läbimõõt on vahemikus 5–180 um, nagu imetajarakud, putukarakud ja mõned planktonid.
Lahtri suuruse mõõtmine
Joonis 2 CHO rakkude raku suuruse mõõtmine enne ja pärast plasmiidi transfektsiooni.
A. Trüpaansinisega värvitud CHO-rakkude suspensiooni kujutised enne ja pärast plasmiidi transfektsiooni.
B. CHO raku suuruse histogrammi võrdlus enne ja pärast plasmiidi transfektsiooni.
Rakkude suuruse muutus on põhitunnus ja seda mõõdetakse tavaliselt rakuuuringutes.Tavaliselt mõõdetakse seda nendes katsetes: rakkude transfektsioon, ravimitest ja raku aktiveerimise testid.Countstar pakub statistilisi morfoloogiaandmeid, näiteks rakkude suurust, 20 sekundi jooksul.
Countstari automatiseeritud rakuloendur võib anda rakkude morfoloogilisi andmeid, sealhulgas ringikujulisuse ja läbimõõdu histogramme.
